运动神经元（Mntor Nerons，MNs）作为中枢神经系统中的终末分化细胞，具有不可再生的特性，这极大限制了运动神经元疾病（MNDs）的治疗。而MNs丢失或功能障碍是许多严重神经系统疾病的根本病理基础，例如肌萎缩侧索硬化症（ALS）和脊髓性肌萎缩症（SMA），最终导致肌肉无力、萎缩和瘫痪。因此，探索运动神经元的修复与再生，一直是神经科学研究的重要前沿方向。

诱导多能干细胞（Induced Pluripotent Stem Cells，iPSCs）是一种类似于胚胎干细胞（ESCs）的多潜能干细胞，可从患者皮肤或血液细胞重编程获得，这提供了从健康和患病个体中产生特定细胞类型的机会。昂朴采用四步分化方案，从hiPSC中成功分化出功能齐全的成熟运动神经元，在iPSC分化第12天时形成高纯度运动神经元祖细胞群，并在分化第28天时形成>80%富集功能性MNs群体。这为了解ALS等发病机制、确定新的治疗途径和研究潜在治疗化合物提供了宝贵工具。

hiPSC-MNs诱导过程时间表

一、运动神经元分化鉴定

1、细胞明场图片

运动神经元前体复苏后培养10天，呈现胞体圆润，神经突触顺滑的形态，细胞状态良好。

2、免疫荧光鉴定

（a）

（b）

hiPSC诱导分化为MNs。（a）细胞复苏培养10天后免疫荧光代表性图像，hiPSC-MNs中ISL1、神经元标志β-tubulin-Ⅲ（TUJ1）和胆碱能细胞标志VAChT等蛋白的表达情况，细胞核用Hoescht染色。Scale bar：200 μm。（b）健康和患病个体来源的多克隆iPSC-MNs中ISL1和VAChT阳性率统计图。数据以均值±SEM表示，n=6。其中Ctrl为健康个体来源iPSC-MNs，SOD1/TARDBP为患病个体来源iPSC-MNs。在健康对照组（Ctrl）及SOD1/TARDBP突变型ALS疾病模型来源的iPSC-MNs中，ISL1⁺及VAChT⁺细胞比例均超过80%，表明分化运动神经元具有成熟的分子特征，且组间分化无差异。

3、电生理检测

hiPSC诱导分化为功能成熟的MNs。通过细胞膜片钳技术检测MNs电生理功能，结果显示在记录的5个细胞中，平均细胞电阻（Rin）为11.27±3.22GΩ。在这些细胞中，通过记录从-40mV到+40mV的voltage steps，我们观察到内向Na+和外向K+电流说明分化的神经元Na/K通道的生理功能正常，具有发放动作电位的生理基础。记录到诱发动作电位发放正常，提示分化后的神经元具有良好的神经细胞活性。

二、hiPSC-MNs产品优势

1、“高”：分化高效、纯度高、产量高、成熟度高且轴突分支复杂。

2、“稳”：分化效率稳定、纯度稳定、可长时间稳定培养。

3、“精”：疾病建模精准性

患者来源iPSC-MNs保留遗传病变（如SOD1突变），能在体外重现ALS等关键病理，例如神经丝蛋白（NEFL/NEFH）异常积聚、谷氨酸受体（GRIN2A/GRIK1）信号失调和早期蛋白聚集体形成等。并且hiPSC-MNs克服了ESC临床应用中带来的免疫排斥及伦理问题而具有重要的临床应用价值。

4、“易”：易于获得、易于培养。

5、“广”：应用范围广

（a）可用于筛选MN病理表型:利用荧光成像进行运动神经元病理表型的指标鉴定，包括SOD1、TDP43蛋白的异常聚集，轴突长度变短和运输受损等；

（b）可用于MN药物筛选的试验平台：结合微电极阵列（MEA）和神经突追踪技术，快速评估药物毒性或保护效应等。